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Mouse and hamster scrapie and bovine spongiform encephalopathy (BSE) prion were used for seed. In 2008, cell lysate was prepared from prion protein (PrP)-gene deficient cell re-introduced with mouse, hamster, and bovine PrP-gene. In 2009, we compared the in vitro amplification efficiency in PMCA among hamster scrapie 263K, mouse scrapie Obihiro, mouse Chandler scrapie prions. As the results, PrP^\u003cres\u003e could be amplified from brain homogenates infected with 263K and Chandler prion under the condition of PBS containing 1% TritonX-100, 4mM EDTA (40 cycles), whereas Obihiro prion could not be amplified. In addition, PMCA using cell lysate required different conditions for PrP^\u003cres\u003e amplification compared to brain homogenate. 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  1. その他
  1. 部局別インデックス
  2. 医学部

In vitroプリオン増殖機構解析:PrP遺伝子欠損細胞を用いた改良PMCA法

http://hdl.handle.net/20.500.12000/18127
http://hdl.handle.net/20.500.12000/18127
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名前 / ファイル ライセンス アクション
20780219seika.pdf 20780219seika.pdf
Item type デフォルトアイテムタイプ(フル)(1)
公開日 2010-09-29
タイトル
タイトル In vitroプリオン増殖機構解析:PrP遺伝子欠損細胞を用いた改良PMCA法
言語 ja
作成者 作道, 章一

× 作道, 章一

ja 作道, 章一

Sakudo, Akikazu

× Sakudo, Akikazu

en Sakudo, Akikazu

アクセス権
アクセス権 open access
アクセス権URI http://purl.org/coar/access_right/c_abf2
主題
言語 ja
主題Scheme Other
主題 微生物
言語 ja
主題Scheme Other
主題 獣医学
言語 ja
主題Scheme Other
主題 感染症
言語 ja
主題Scheme Other
主題 ウイルス
言語 ja
主題Scheme Other
主題 神経科学
言語 ja
主題Scheme Other
主題 プリオン
言語 ja
主題Scheme Other
主題 人獣共通感染症
言語 ja
主題Scheme Other
主題 人畜共通感染症
内容記述
内容記述タイプ Other
内容記述 科研費番号: 20780219
内容記述タイプ Other
内容記述 2008年度~2009年度科学研究費補助金(若手研究(B))研究成果報告書
内容記述タイプ Other
内容記述 研究概要(和文):本研究では、プリオン蛋白質(PrP)遺伝子欠損マウス神経細胞株(HpL)にマウスPrP遺伝子もしくは異種PrP(ハムスター、ウシ)を導入した細胞のライゼートを正常型PrP(PrP^C)供給源としてprotein misfolding cyclic amplification (PMCA)を行うとともに、マウススクレイピープリオンもしくは異種プリオン(それぞれハムスタースクレイピープリオン、Bovine spongiform encephalopathy (BSE)プリオン)存在下で、異常型PrP(PrP^<Sc>)増幅の有無からPrP^<Sc>増幅に必要な条件についての基礎的データを得ることを目的とした。PMCA法によるハムスター263K株、マウスObihiro株、マウスChandler株の試験管内増幅による比較を行った結果、263K株とChandler株は脳ホモジネートをPrP^C供給源とした場合、既存の条件(1% TritonX-100, 4mM EDTA含PBS、40 cycle)でPrP^<res>(蛋白質分解酵素抵抗性PrP)の増幅が可能であったが、Obihiro株では同条件では増幅がされなかった。さらに、HpLにマウスPrP遺伝子やハムスターPrPを導入した細胞の細胞ライゼートをPrP^C供給源として試験管内増幅を行ったところ、同条件では263K株とchandler株のいずれも増幅がされなかった。これらのことから、プリオン株ごとに条件設定が必要であるとともに、細胞ライゼートを用いた場合、脳ホモジネートの条件とは異なる増幅条件が必要であることが明らかとなった。本研究の結果から、PMCA法によるPrP^<res>の増幅条件はプリオン株やPrP^C供給源の性状ごとに最適化する必要があることが明らかになったとともに、動物を用いないプリオン検出系として、広範なプリオン株に適応可能なPMCA条件の構築が必要であることが示唆された。
内容記述タイプ Other
内容記述 研究概要(英文) : In this study, protein misfolding cyclic amplification (PMCA) was performed using prion protein (PrP)-gene deficient cell line as the source of cellular PrP. Mouse and hamster scrapie and bovine spongiform encephalopathy (BSE) prion were used for seed. In 2008, cell lysate was prepared from prion protein (PrP)-gene deficient cell re-introduced with mouse, hamster, and bovine PrP-gene. In 2009, we compared the in vitro amplification efficiency in PMCA among hamster scrapie 263K, mouse scrapie Obihiro, mouse Chandler scrapie prions. As the results, PrP^<res> could be amplified from brain homogenates infected with 263K and Chandler prion under the condition of PBS containing 1% TritonX-100, 4mM EDTA (40 cycles), whereas Obihiro prion could not be amplified. In addition, PMCA using cell lysate required different conditions for PrP^<res> amplification compared to brain homogenate. Therefore, we concluded that the adaptation of PMCA conditions were required for efficient PrP^<res> proliferation depending on prion strains and PrP^C sources.
内容記述タイプ Other
内容記述 研究報告書
出版者
言語 ja
出版者 作道章一
言語
言語 jpn
資源タイプ
資源タイプ research report
資源タイプ識別子 http://purl.org/coar/resource_type/c_18ws
出版タイプ
出版タイプ NA
出版タイプResource http://purl.org/coar/version/c_be7fb7dd8ff6fe43
識別子
識別子 http://hdl.handle.net/20.500.12000/18127
識別子タイプ HDL
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